【求助】蛋白表达

【求助】蛋白表达haikuotiankong发布于 2008-02-21 · 浏览 4027 · IP 英国英国这个帖子发布于 17 年零 81 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。１.请问什么情况下我需要加信号肽序列呢，是为了实现定向表达吗？什么时候不需要加呢？ 我现在想表达一个蛋白质，但我不知道是不是应该加信号肽。2. 请问在附件的蛋白表达起始密码前为什么要加 ACC 序列ECORI ACC ATG full length protein3.另外我还想知道如果我的载体 （pCDNA４ his max)是N terminal His tag, 已经包含了一个起始密码： ATG， 如果我在ATG的后面加如下序列： 变成：ATG+ His tag+随机序列＋ECORI site+kozak sequence+ ATG start codon+ full length reading frame.这样有了两个ATG, 结果会表达融合蛋白呢？ 还是会表达两个不同的蛋白质，到第二个ATG 前会终止， 还是会将第二个ATG表达成一个氨基酸？如果 我不在乎是不是表达his tag fusion 蛋白，这种设计可以吗？谢谢4. 这个载体可以既用于真核细胞表达又用于原核细胞表达吗？5.要用pcDNA4 hismax 表达载体转染Hela 细胞，ATG 起始密码可以吗？我以前只做未翻译区的表达，这次是别的老师让我帮他的学生做，更加觉得责任重大。她已经做了一半了，没做出来。我正在想是不是重新设计，还是用她以前的设计。pcDNA4 hismax已经包含了translational enhancer 了，真不清楚他们为什么还要在另外一个ATG 的前面加一段kozak sequence 进去。您说有这个必要吗？如果这两个ATG 不在同一阅读框架的话，第二个ATG 还能正常表达吗？她并不需要表达融合蛋白，估计正好手边有这个载体。她只想在细胞内表达这个蛋白，然后用siRNA knock down.6. 谁可以帮我提供一个完整的重新设计的思路？７：大家通常是直接克隆，还是经过pGEMT easy vector? 我以前用pGEMT easy vector 用得特别顺手。还没换过。

最后编辑于 2008-02-21 · 浏览 4027

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